樣品采集 選擇無口腔軟組織炎癥、無牙周疾病的志愿者31例,男性14人,女性17人,年齡16～40歲。采樣前24小時(shí)禁止口腔衛(wèi)生,正常飲食。樣品采集前用清水充分漱口以去除食物殘?jiān)败浌浮Ｊ占匀环谴碳ば曰旌闲酝僖? ml,為對(duì)照組;再用棉墊隔離牙菌斑收集區(qū),用無菌蠟刀和探針刮取全牙面菌斑（下頜前牙區(qū)除外）,用菌斑染色劑檢測(cè)所取部位,若該部位仍殘留部分菌斑,則上述所取菌斑為有效,為實(shí)驗(yàn)組。否則為無效。取樣均在上午8～9時(shí),10時(shí)進(jìn)行發(fā)光強(qiáng)度測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)步驟 先測(cè)定發(fā)光值強(qiáng)度。測(cè)定條件為25 ℃,60秒。實(shí)驗(yàn)組樣品加1.0 ml NS,勻漿管內(nèi)勻漿,取0.1 ml勻漿液置于化學(xué)發(fā)光管中,分別加NS或SOD液10 μl測(cè)定本底后,加L液0.1 ml進(jìn)行化學(xué)發(fā)光測(cè)定,得到（NS+L）組和（SOD+L）組發(fā)光值。同法取0.1 ml唾液分別加（NS+L）和（SOD+L）測(cè)定發(fā)光值作為對(duì)照組值。
蛋白定量 采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。取0.5 mg/ml牛血清白蛋白10 μl（即5 μg）作標(biāo)準(zhǔn),生理鹽水10 μl為空白對(duì)照,剩余勻漿液或唾液5 μl加生理鹽水5 μl為樣品。然后加考馬斯亮藍(lán)試劑200 μl。混勻放置10分鐘,600 nm波長測(cè)吸光度（A）值。根據(jù)（A）值得到每份樣品的蛋白含量,進(jìn)而得到樣品中每毫克蛋白每秒發(fā)光值。
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均含有超氧化物陰離子自由基,實(shí)驗(yàn)組中超氧化物陰離子自由基的水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組,兩組之間的抑制發(fā)光強(qiáng)度值比為29.1/0.36=81倍,即菌斑內(nèi)自由基含量明顯高于唾液內(nèi)自由基含量。
本測(cè)定結(jié)果,菌斑中自由基的水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于唾液中自由基水平,可以排除因唾液自由基水平升高繼而造成菌斑中自由基水平升高的可能性。同時(shí),菌斑附著牙面的牙體硬組織代謝活動(dòng)不可能產(chǎn)生如此高濃度的自由基。因此,本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到的超氧化物陰離子自由基只可能是由菌斑組織的存在而產(chǎn)生的。
本測(cè)定結(jié)果可見SOD對(duì)菌斑發(fā)光強(qiáng)度抑制率明顯高于對(duì)唾液發(fā)光強(qiáng)度的抑制,說明SOD對(duì)超氧化物陰離子自由基的特異性抑制作用,也說明所取菌斑樣品并非食物殘?jiān)蜍浌?。食物殘?jiān)蜍浌钢锌赡苡邪l(fā)光物質(zhì)的存在,但SOD并不抑制其發(fā)光,SOD只可能抑制細(xì)菌代謝過程中產(chǎn)生的超氧化物陰離子自由基。
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