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HPLC使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法
1. 排氣閥里的過(guò)濾經(jīng)常芯堵塞
如果是排氣閥里的過(guò)濾芯堵塞引起的壓力升高，請(qǐng)仔細(xì)檢查一下?lián)Q下來(lái)的過(guò)濾芯。正常情況下，一個(gè)過(guò)濾芯可以使用6個(gè)月左右，如果經(jīng)常更換就有問(wèn)題。
- 如果過(guò)濾芯的顏色發(fā)黑，說(shuō)明是被柱塞密封墊磨損下來(lái)的碎屑堵塞的，請(qǐng)確認(rèn)流動(dòng)相使用的緩沖鹽的濃度是否太高了，是否使用了柱塞清洗裝置。 緩沖液在泵頭內(nèi)部析出的鹽的結(jié)晶會(huì)加速密封墊的磨損。
- 如果過(guò)濾芯的顏色是乳白色的，非常干凈。說(shuō)明過(guò)濾芯很有可能是被流動(dòng)相污染了。 請(qǐng)檢查一下您是否使用了過(guò)期的溶劑（水，有機(jī)溶劑），或質(zhì)量不好的溶劑。請(qǐng)馬上更換別的品牌的溶劑或使用純凈水（推薦：娃哈哈純凈水）。
如果流動(dòng)相經(jīng)過(guò)了濾膜過(guò)濾，請(qǐng)確認(rèn)是否使用了正確的，的濾膜。建議您先不要使用濾膜過(guò)濾流動(dòng)相，看看是否可以解決過(guò)濾芯堵塞的問(wèn)題。
- 如果存放緩沖液或水的溶劑瓶不經(jīng)常清洗，該通路會(huì)生長(zhǎng)藻類(lèi)，藻類(lèi)會(huì)污染整個(gè)流路系統(tǒng)和脫氣機(jī)的腔體，藻類(lèi)及其代謝產(chǎn)物也會(huì)堵塞過(guò)濾芯。如果發(fā)生了這種情況，建議用60度的熱水清洗溶劑瓶，并用異丙醇清洗整個(gè)管路和脫氣機(jī)。建議以后一定要用棕色瓶存放緩沖溶液，避光，并且定期清洗溶劑瓶。
HPLC使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法
2.峰面積或峰高重現(xiàn)性不好，偏差大
如果HPLC系統(tǒng)配有自動(dòng)進(jìn)樣器，這種情況主要是自動(dòng)進(jìn)樣器的問(wèn)題。
- 首先確認(rèn)柱前壓是穩(wěn)定的，保留時(shí)間的重現(xiàn)性好（參見(jiàn)第1，2條）
- 將自動(dòng)進(jìn)樣器的抽樣速度降低到50ul/min以下 （默認(rèn)值是200ul/min）.您的樣品有可能粘度較大，降低抽樣速度可以極大地改善粘度較大的樣品的進(jìn)樣精度。
- 如果進(jìn)樣針或針座有輕微的堵塞，對(duì)進(jìn)樣精度的影響也非常大。請(qǐng)參考第5條的處理辦法。
- 如果是手動(dòng)進(jìn)樣器，請(qǐng)確認(rèn)一定要使用Agilent配的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣針，且進(jìn)樣器的廢液出口要與進(jìn)樣口水平，避免虹吸的影響。如果是滿Loop進(jìn)樣，建議注
射5倍Loop的進(jìn)樣體積。
HPLC使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法