產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱：293 [HEK-293] (胚腎細(xì)胞)

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

生長培養(yǎng)基：MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S

名稱293 [HEK-293] (人胚腎細(xì)胞) (STR鑒定正確)

別稱Hek293; HEK-293; HEK 293; HEK:293; 293; 293 HEK; Human Embryonic Kidney 293

背景描述293 [HEK-293]細(xì)胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞形成的永生化細(xì)胞，293 [HEK-293]細(xì)胞包含并表達(dá)轉(zhuǎn)染的Ad5基因。早期報(bào)道中指出，293 [HEK-293]細(xì)胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對Ad5的插入點(diǎn)的克隆測序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細(xì)胞19號染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主，可表達(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。

種屬人

年齡（性別）胚胎

組織來源腎；以腺病毒5DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化

生長特性貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞類型轉(zhuǎn)化細(xì)胞系

生物安全等級2

生長培養(yǎng)基MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時間~24-30 hours

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO?，5%

溫度：37℃

致瘤性Yes, forms tumors in nude mice.

受體表達(dá)情況vitronectin

注意事項(xiàng)該細(xì)胞貼壁松散，操作時請盡量輕柔；換液時需預(yù)熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán)，為正常現(xiàn)象，請按照收貨注意事項(xiàng)處理。

冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

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小鼠大內(nèi)皮素(BigET)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

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小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠白介素27(IL-27)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

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人胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK/CXCL14)ELISA試劑盒    Human Breast and kidney expressed chemokine, BRAK Elisa Kit    96T/48T

人B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒     Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1, BLC-1 Elisa Kit    96T/48T

人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒     Human connective tissue-activating peptide Ⅲ, CTAPⅢ Elisa Kit    96T/48T

a Kit    96T/48T

Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin E, FcεRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ  Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒     Human ReceptorⅠfor the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit     96T/48T

人粒細(xì)胞趨化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA試劑盒    Human granulocyte chemotactic protein-2, GCP-2 Elisa Kit     96T/48T

人糖基化依賴的細(xì)胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA試劑盒     Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1, GlyCAM-1 Elisa Kit    96T/48T

人干擾素調(diào)節(jié)因子(IRF)ELISA試劑盒     Human interferon Regulatory Factor, IRF Elisa Kit    96T/48T

人淋巴毒素β(LTB)ELISA試劑盒     Human lymphotoxinβ, LTB Elisa Kit    96T/48T

人淋巴毒素α(LTA)ELISA試劑盒     Human lymphotoxinα, LTA Elisa Kit    96T/48T

人CC趨化因子受體1(CCR1)ELISA試劑盒    Human CC-chemokine receptor 1, CCR1 Elisa Kit    96T/48T

293 [HEK-293] (胚腎細(xì)胞)說明書人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)ELISA試劑盒    Human CX3C-chemokine receptor 1, CX3CR1 Elisa Kit    96T/48T

人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)ELISA試劑盒     Human pulmonary activation regulated chemokine, PARC Elisa Kit    96T/48T

人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA試劑盒    Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1, MAdCAM-1 Elisa Kit    96T/48T

人β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒    Human Interferon β, IFN-β/IFNB Elisa Kit     96T/48T

人可溶性CD38(sCD38)ELISA試劑盒    Human Soluble Cluster of differentiation 38, sCD38 Elisa Kit    96T/48T

培養(yǎng)操作:

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。