特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 蜜蜂球囊菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Ascosphaera apis | 貨號(hào) | YSP96386 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩?lái)說(shuō),SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題,反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 奧美拉唑 (標(biāo)準(zhǔn)品)C50H80O28氟肉桂 氯唑沙宗C44H70O22鹽酸阿米替林 氯唑沙宗(標(biāo)準(zhǔn)品)C20H24NO4Cl乙基酚 D-氨基葡萄糖鹽酸鹽C25H22O10反式-(1R,2R)-2-氨基環(huán)戊鹽酸鹽 鹽酸氨基葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)C36H49NO122-氨基-5-溴-芐氧基吡啶 氟派利多,氟哌利多C30H42O72-甲基-6-三氟 氟派利多,氟哌利多(標(biāo)準(zhǔn)品)C30H40O7氯-7-氮雜吲哚 6-疏基嘌呤/6-巰基嘌呤(一水合物)C30H44O2麥芽糖 撲熱息痛/對(duì)乙酰氨基酚C18H36O溴-2-羥基甲 撲熱息痛(標(biāo)準(zhǔn)品)C11H16O2[(2-)氨基] (R)-1-氨基-甲基丁基酸蒎烷二酯三氟醋酸鹽C15H12O5N-甲基-氯哌啶 奧拉帕尼C20H17N3O4羰基-環(huán)丁烷甲酸甲酯 花椒毒素/8-甲氧基補(bǔ)骨脂素/甲氧C30H48O43,5-二氨基三氟甲 花椒毒素/甲氧(標(biāo)準(zhǔn)品)C20H24O12異基三基化膦 奎尼丁C17H11NO45-溴-2-氟嘧啶 單月桂酸甘油酯/甘油一月桂酸酯C19H28O8芐磺酰氯 甘油單油酸酯/單油酸甘油酯C46H54N4O12S2,5-二氯-硝基吡啶 ADP.Na2; 5'-二酸腺苷二鈉/腺苷-5'-二酸二鈉鹽C21H24N2O2·C4H6O6α-萜品 蜜蜂球囊菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒多巴(DA)ELISA試劑盒CD5 CD5抗體100 ul 端粒酶()ELISA試劑盒CD5L/Api6 CD5L抗體100 ul 毒蕈型乙酰膽受體M2(mAChRM2)自身抗體ELISA試劑盒CD6/TP120 CD6抗體100 ul 毒蕈鹼乙酰膽受體M2(CHRM2)ELISA試劑盒CD54/ICAM-1 細(xì)胞間粘附分子-1抗體100 ul 疊氮胸苷(AZT)ELISA試劑盒ICAM-2/CD102 細(xì)胞間粘附分子-2抗體20 ul 凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA試劑盒ICAM-3/CD50 細(xì)胞間粘附分子-3抗體100 ul 凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒CD55/DAF 衰變加速因子CD55抗體20 ul 凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒CD59 CD59抗體100 ul 抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒CD56/NCAM1 CD56抗體100 ul |