客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
1,1,2,2-四氯乙烷(Standard for GC)Shh (C9C5) Rabbit mAb2-氯-6-氟甲酸

二硫化碳(Standard for GC, ≥99.9% (GC))RPA32/RPA2 (4E4) Rat mAb5-溴-2-三氟甲基吡啶

巴豆酸(standard for GC,≥99.9%(GC))RPA32/RPA2 (4E4) Rat mAb2-氟-硝

環(huán)戊(standard for GC,≥99.5%(GC))Toll-like Receptor 1 Antibody(氨基基)啉-酮

鄰氯(standard for GC,>99.5%(GC))Toll-like Receptor 1 Antibody5-甲氧基吲哚-2-羧酸

氯代叔丁烷(GCS,≥99.5% (GC))Jagged2 (C23D2) Rabbit mAb2-基

環(huán)己(Standard for GC,>99.5%(GC))Jagged2 (C23D2) Rabbit mAb氨基-(甲氧基基)酸

氯(standard for GC, ≥99.9% (GC))Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) Antibody溴-5-氯酚

鄰氯甲(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) Antibody(R)-(-)-氯-1,2-縮酮

鄰甲酚(Standard for GC,≥99.7%(GC))Glut4 (1F8) Mouse mAb3,6-二溴-9-基咔唑

間甲酚(Standard for GC,≥99.7%(GC))Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser240/244) Antibody2-氨基-甲酸甲酯

對(duì)甲酚(Standard for GC,≥99.7%(GC))PU.1 (9G7) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)氯-2-吡啶甲酸

環(huán)戊酮(Standard for GC,≥99.5%(GC))S6 Ribosomal Proin (5G10) Rabbit mAb聯(lián)

正己(standard for GC,≥99.0%(GC))S6 Ribosomal Proin (5G10) Rabbit mAb2,二氯喹喔啉

氯代仲丁烷(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-EGF Receptor (Tyr1086) Antibody環(huán)甲脒鹽酸鹽

氯代正己烷(standard for GC,≥99.5%(GC))Anisomycin5-氯-2-氟

1-氯代正戊烷(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Caspase-2 (C2) Mouse mAb2-溴-5-氟

環(huán)戊(Standard for GC,>99.5%（GC))Caspase-2 (C2) Mouse mAb5-溴-2-氯
羊痘病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒α1β糖蛋白(α1β-GP)ELISA試劑盒Livin  凋亡抑制蛋白抗體100 ul

α/β干擾素受體(IFN-α/βR)ELISA試劑盒phospho-LKB1(Thr363)  酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體100 ul

Z-DNA結(jié)合蛋白1(ZBP1)ELISA試劑盒phospho-LKB1(Ser334)  酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體20 ul

Wnt-3a蛋白(WNT3A)ELISA試劑盒phospho-LKB1(Ser428)  酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體1 Kit

v-rel禽網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞過多癥病毒癌基因同源物B(RelB)ELISA試劑盒Phospho-LKB1(Thr189)  酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體100µg

vav3鳥嘌呤核苷酸交換因子(VAV3)ELISA試劑盒LFABP/FABP-1  肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體100 ul

U型肌酸激酶,線粒體(CKMT1A)ELISA試劑盒LFABP/FABP-2  肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體100 ul

UV切除修復(fù)蛋白R(shí)AD23 同源物A(RAD23A)ELISA試劑盒l(wèi)aminin  層粘連蛋白抗體100 ug

U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)ELISA試劑盒Laminin Beta 1  層粘連蛋白β1抗體1 Kit
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。