產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱(chēng)：莢膜組織胞漿菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
英文名稱(chēng)：Histoplasma capsulatumPCR
編號(hào)：HE31089-R
類(lèi)別:PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
?
儲(chǔ)需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
保存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
乳糖-明膠培養(yǎng)基/Lactose-Gelatin Medium 包裝;5g

葡萄糖酪胨瓊脂/Dextrose Casein Peptone Agar 包裝;1g

胰月示-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂基礎(chǔ)/TSC瓊脂/TSC Agar 包裝;250mg

多價(jià)蛋白胨-酵母膏培養(yǎng)基/PY培養(yǎng)基/PY Medium 包裝;5g

產(chǎn)芽孢肉湯/Sporulation Broth 包裝;100g

HE瓊脂/Hektoen瓊脂培養(yǎng)基/腸道病菌培養(yǎng)用瓊脂/Hektoen Enteric Agar 包裝;25g

克氏鐵瓊脂/KIA 包裝;500g

去氧膽酸鹽瓊脂/脫氧膽酸鈉瓊脂/DCLA 包裝;5g

中國(guó)藍(lán)乳糖瓊脂/中國(guó)藍(lán)瓊脂/China Blue Lactose Agar 包裝;1g

膽硫乳瓊脂/膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基/DHL瓊脂/DHL Agar 包裝;25g

慶大霉素瓊脂/Gentamycin Agar 包裝;5g

米勒-海頓瓊脂/MH瓊脂/MHA 包裝;1g

米勒-海頓肉湯/M湯/酪蛋白肉湯/解酪蛋白肉湯/MHB 包裝;250mg

抗生素Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基(PH6.5-6.6)/抗生素1號(hào)培養(yǎng)基(PH6.5-6.6)/Antibiotic Agar 包裝;100g

抗生素Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基(PH7.8-8.0)/抗生素1號(hào)培養(yǎng)基(PH7.8-8.0)/阿奇霉素檢定培養(yǎng)基/Antibiotic Agar 包裝;25g

抗生素Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基(PH6.5-6.6)/抗生素2號(hào)培養(yǎng)基(PH6.5-6.6)/Antibiotic Agar NO.2 包裝;100g

抗生素Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基(PH7.8-8.0)/抗生素2號(hào)培養(yǎng)基(PH7.8-8.0)/Antibiotic Agar NO.2 包裝;25g
莢膜組織胞漿菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)Shewanella│sp. 中文名稱(chēng)：希瓦氏菌種屬:Shewanella│sp.分離基物:土壤/海沙提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:微生物/耐冷菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:5℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：D,99%

Mesorhizobium│sp. 中文名稱(chēng)：中間根瘤菌種屬:Mesorhizobium│sp.分離基物:沉積物/箱式樣品提供形式:凍干物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的新種培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：99%

Cellulomonas│carbonis 中文名稱(chēng)：纖維單胞菌(加詞待譯)種屬:Cellulomonas│carbonis分離基物:沉積物/多管樣品提供形式:凍干物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:海洋放線菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：99%

Dietzia│maris 中文名稱(chēng)：海迪茨氏菌種屬:Dietzia│maris分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:微生物/高溫菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:55℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：>98.0%(GC)

Cyclobacterium│marinum 中文名稱(chēng)：海環(huán)桿菌種屬:Cyclobacterium│marinum分離基物:沉積物/淺黃色沉積物0-5cm提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：≥98%

Salegentibacter│mishustinae 中文名稱(chēng)：米氏需鹽桿菌種屬:Salegentibacter│mishustinae分離基物:沉積物/淺黃色沉積物0-5cm提供形式:凍干物模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：≥98%

Salegentibacter│sp 中文名稱(chēng)：需鹽桿菌種屬:Salegentibacter│sp分離基物:沉積物/棕黃色沉積物0-5cm提供形式:凍干物模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：99%

Bacillus│pumilus 中文名稱(chēng)：短小芽胞桿菌種屬:Bacillus│pumilus分離基物:樣/上層海提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:potential antifouling 潛在的抗污損活性培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:469生長(zhǎng)條件:30℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：99%
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
產(chǎn)品僅用于科研發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。