特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 馬梭菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Clostridium equi | 貨號 | YSP96558 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 癸二酸二乙酯(Standard for GC, ≥99.5% (GC))IKKβ (L570) Antibody5-溴-2-氟酚 2,二氯酚(standard for GC,≥99.5%(GC))Calnexin (C5C9) Rabbit mAb三乙四 二乙二單甲(standard for GC)Calnexin (C5C9) Rabbit mAb(S)-叔亮氨 二乙二乙(Standard for GC, ≥99.5% (GC))p35/25 (C64B10) Rabbit mAb(+)-二異松蒎基氯烷 對二氯(Standard for GC,>99.5%(GC))Acetyl-Histone H3 (Lys14) (D4B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)環(huán)己甲酰 二十二烷(standard for GC,≥99.0%(GC))IKKα Antibody1,二氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸叔丁酯 三十二烷(standard for GC,≥98.0%(GC))Phospho-Atg13 (Ser355) (D6J1W) Rabbit mAb二縮三乙二 正癸烷(standard for GC,≥99.5%(GC))PKCε (22B10) Rabbit mAb甲氧基吡啶-N-氧化物 1,1-二氯乙烷(Standard for GC,≥99.5%(GC))IKKβ Antibody癸基溴 2,2-二甲基丁烷(Standard for GC,≥99.5%(GC))IKKγ Antibody1-癸 2,二甲基丁烷(Standard for GC,>99.5%(GC))OGDH (E1W8H) Rabbit mAb3,二甲基谷酰 甲(Standard for GC)Phospho-IKKγ (Ser376) Antibody2,6-二甲 甲酸(Standard for GC,>99%)IKKε Antibody十一烷酸 呋喃(standard for GC,≥99.5%(GC))IKKε Antibody十二 正庚烷(Standard for GC,>99.5%(GC))PRAS40 (D23C7) XP® Rabbit mAb十二 正庚(Standard for GC,>99.5%(GC))PRAS40 (D23C7) XP® Rabbit mAb甲二甲縮 γ -丁內(nèi)酯(GBL)(standard for GC,≥99.9%(GC))Phospho-Smad2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb (PE Conjuga)對酸甲酯 1-己(Standard for GC)Phospho-IKKα/β (Ser176/180) Antibody II溴代十四烷 馬梭菌探針法熒光PCR檢測試劑盒25羥基維生素D2(25 HVD2)ELISA試劑盒NF-66 α-中連蛋白抗體20 ul 20S蛋白酶體(20SP)ELISA試劑盒NF-L/68kDa neurofilament 低分子量神經(jīng)絲蛋白抗體100 ul 2,3-二酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA試劑盒NF-M 中分子量神經(jīng)絲蛋白抗體20 ul 2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)ELISA試劑盒NGAL/Lipocalin 2 脂質(zhì)運載蛋白抗體100 ul 2 型次核苷酸脫氫酶(IMPDH)(IMPDH2)ELISA試劑盒NF-KappaB p105 細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體20 ul Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒Phospho-NF-KappaB p105 (Ser927) 酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體2.5 mg Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒Phospho-NF-KappaB p105 (Ser933) 酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體100 ul Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒NGFR/p75NTR 神經(jīng)生長因子受體抗體100 ul Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(CTX-I)ELISA試劑盒NGF-beta 神經(jīng)生長因子-β抗體100 ul |