熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
賴氨酰氧化酶樣蛋白4(LOXL4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　≥99%　產(chǎn)黑色鏈霉菌　250mg

內(nèi)皮細(xì)胞特異分子1(ESM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　黃桿菌　25g

金屬硫蛋白1E(MT1E)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　藍(lán)色犁頭霉　5g

凝血因子Ⅵ(F6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　95%　白地霉　5g

無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員4(WNT4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　>98.0%(HPLC)　球毛殼菌　1g

USP6氨基端樣蛋白(USP6NL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　>98.0%(HPLC)　鉤狀木霉　5g

血幼素(HJV)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　鏈格孢屬　1g

鹽皮質(zhì)激素受體(MR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99 atom % D　綠葉假單胞菌　1g

AMPA離子能谷氨酸受體1(GRIA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　枯草芽孢桿菌　1g

N-甲基-D-天氡氨酸離子能谷氨酸受體1(GRIN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　東方伊薩酵母　250mg

殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　短小芽孢桿菌　5g

骨骼肌肌動(dòng)蛋白α1(ACTα1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　≥98%　釀酒酵母　100ml

骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　≥98%　Luteolibacter　25ml

細(xì)胞色素P450家族成員1B1(CYP1B1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　95%　埃希氏菌屬　10g

肌球蛋白重鏈6(MYH6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　1M THF溶液　白乳菇　100ml

絲裂原激活蛋白激酶激酶1(MAP2K1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　1M THF溶液　高地芽胞桿菌　25ml

血小板反應(yīng)蛋白2(THBS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　1M THF溶液　晦澀小粘束霉　500ml

肝配蛋白A受體10(EPHA10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　果生鏈核盤菌　1g
鴿痘病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒鈣粘蛋白15抗體5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 3a)  5-羥色受體3抗原100 ul

分子伴侶復(fù)合體TCP-1β抗體5-HTR4(5 hydroxytryptamine serotonin receptor 4)  5-羥色受體4抗原300 ul

細(xì)胞分裂周期蛋白25C抗體AT (Angionogen)  血管緊張素原（抗原）100 ul

過敏毒素C4/補(bǔ)體C4抗體5-LOX (5-lipoxygenase)  5-脂氧合酶抗原100 ul

脂肪酸結(jié)合蛋白3抗體Apo-E (Apolipoproin E)  載脂蛋白E（抗原）300 ul

16號(hào)染色體開放閱讀框48抗體IKI3 family proin  300 ul

細(xì)胞色素P450 19抗體ILK-1 (Ingrin-linked proin kinase 1)  整合素連接激酶-1100 ul

CD28抗體Aromatase  芳香化酶（抗原）300 ul

1號(hào)染色體開放閱讀框195抗體ART(Armin)(抗原)  100 ul