特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 洋蔥伯克氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Burkholderia cepacia | 貨號 | YSP96486 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 四正丁基氯化銨[離子對色譜級]PhosphoPlus® Tau (Thr181) Antibody Duet5-氯-2-三氟甲 四丁基酸氫銨 (0.5mol/L的水溶液)[離子對色譜級]PathScan<sup>® </sup>Total B7-H4 Sandwich ELISA Kit異丁酸異戊酯 四丁基硫酸氫銨[離子對色譜級]ARFGAP1 (D9A4V) Rabbit mAb乙氧基甲酰氯 十二烷基*基氯化[離子對色譜級]Phospho-HER3/ErbB3 (Tyr1328) (E1J1T) Rabbit mAb溴-2-氟 乙酸二丁基銨(約0.5mol/L的水溶液)[離子對色譜級]UBQLN1 (D3T7F) Rabbit mAb(S)-氨基四 乙酸二基銨(約0.5mol/L的水溶液)[離子對色譜級]Aromatase (D5Q2Y) Rabbit mAb2-環(huán)己基乙 乙酸二戊基銨(約0.5mol/L水溶液)[離子對色譜級]Phospho-DDR1 (Tyr513) (E1N8F) Rabbit mAb馬來酸二辛酯 乙酸二己基銨(約0.5mol/L的水溶液)[離子對色譜級]IGF-I Receptor β (D4O6W) Rabbit mAb (IHC Preferred)2-溴-三氟甲酸 1-烷磺酸鈉[離子對色譜級]MBD3 (N87) Antibody偏酸銨 1-丁烷磺酸鈉[離子對色譜級]T Cell Signaling Antibody Sampler Kit溴肉桂 1-戊烷磺酸鈉[離子對色譜級]INPP4b (D9K1B) XP® Rabbit mAb2-(2-氯乙氧基)乙酸 1-己烷磺酸鈉[離子對色譜級]INPP4b (D9K1B) XP® Rabbit mAb氨基-2,二氯吡啶 1-庚烷磺酸鈉[離子對色譜級]NMDA Receptor 2B (GluN2B) (D8E10) Rabbit mAbN-乙酰-Β-氨酸 1-辛烷磺酸鈉[離子對色譜級]CART (D6L8J) Rabbit mAb2,4,6-三氟 1-壬烷磺酸鈉[離子對色譜級]MA1/SLC47A1 (D4C6Z) Rabbit mAb1-*基咪唑-甲 1-癸烷磺酸鈉[離子對色譜級]Ret (E1N8X) XP® Rabbit mAb2-氯-氟芐溴 1-十一烷基磺酸鈉[離子對色譜級]Ret (E1N8X) XP® Rabbit mAbN-甲基-硝基芐 1-十二烷基磺酸鈉[離子對色譜級]Synaptotagmin-1 (D33B7) Rabbit mAb2-溴-5- 洋蔥伯克氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA試劑盒HPR1/p84 核基質(zhì)p84蛋白抗體100 ul 蛋白脂質(zhì)蛋白抗體(PLP)ELISA試劑盒HPV 類頭狀瘤病毒抗體100 ul 蛋白水解誘導因子/皮離蛋白(PIF/DCD)ELISA試劑盒HPV16-E6 類頭狀瘤病毒16抗體100 ul 蛋白酶體(prosome,macropain)亞基,β型,2(PSMB2)ELISA試劑盒HPV18 E6 類頭狀瘤病毒18 E6抗體100 ul 蛋白酶體(prosome,macropain)亞基,β型,1(PSMB1)ELISA試劑盒HPV16 E6 + HPV18 E6 類頭狀瘤病毒16/18 E6抗體100 ul 蛋白酶激活復合體亞基2(PSME2)ELISA試劑盒HPV16-E7 類頭狀瘤病毒16-E7抗體100 ul 蛋白酶3特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)ELISA試劑盒Hpt/HP 結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗體100 ul 蛋白酶3抗體(PR3Ab)ELISA試劑盒H-ras/Ras/Ras p21 原癌基因H-ras抗體100 ul 蛋白酶3(PR3)ELISA試劑盒HRG-alpha Heregulin α蛋白抗體100 ul |