樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產品名稱 | 羊仰口線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Bunostomum trigonocephalum | 貨號 | YSP96485 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據分析,提供實驗報告給您。 異辛烷(色譜級)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (HRP Conjuga)反-1,二氯-2- 甲基叔丁基(色譜級)Aurora A (D3E4Q) Rabbit mAb6-羥基-1-萘甲酸 正丁(色譜級)Aurora A (D3E4Q) Rabbit mAb2-氯-氟甲 1-氯丁烷(色譜級)Anoctamin 1 (D1M9Q) Rabbit mAb氯-(三氟甲氧基) N,N-二甲酰(色譜級)PTMScan® Pilot Phospho-Tyrosine Rabbit mAb (P-Tyr-1000) Kit間三氟酮 1,二氧六環(huán)(色譜級)CYR61 (D4H5D) XP® Rabbit mAb甲基吡唑-羧酸 乙二二甲(色譜級)CYR61 (D4H5D) XP® Rabbit mAb雷奈佐利 乙酸乙酯(色譜級)CD39/NTPDase 1 (E2X6B) XP®Rabbit mAb (Mouse Specific)3,6-二氯噠- 甘油(色譜級)CD39/NTPDase 1 (E2X6B) XP®Rabbit mAb (Mouse Specific)2-氨基-三氟 N-甲基吡咯烷酮(NMP)(色譜級)PTMScan<sup>® </sup>Pilot Ubiquitin Remnant Motif (K-ε-GG) Kit2,二氟 甲基環(huán)己烷(色譜級)Rad9A (D2J4P) Rabbit mAb2-氯甲酯 碳酸酯(色譜級)VGLUT2 (D4E3U) Rabbit mAb1,二溴-5-氯 四(色譜級)ATP6V1B2 (D3O7Q) Rabbit mAb溴-甲氧基甲 三乙(色譜級)EDC3 (D2T7U) Rabbit mAb磺?;锹?/span> 三(TFA)(色譜級)OAS1 (D1W3A) Rabbit mAb氯-5-甲氧基-甲酸 四乙基氫氧化銨(10%的水溶液)[離子對色譜級]PTMScan® Pilot Acetyl-Lysine Motif [Ac-K] Kit吡啶-磺酰氯鹽酸鹽 四丁基氫氧化銨(10%的水溶液)[離子對色譜級]EAAT3 (E1E6M) Rabbit mAb丁基黃原酸 四正丁基溴化銨[離子對色譜級]PathScan® Total Ki-67 Sandwich ELISA Kit安宮 羊仰口線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒低密度脂蛋白受體相關蛋白4(LRP-4)ELISA試劑盒HO-2 血紅素氧合酶2抗體100 ul 低密度脂蛋白受體相關蛋白1(LRP-1)ELISA試劑盒HOXB4 HOXB4抗體100 ul 低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)ELISA試劑盒HOXc8 HOXc8抗體100 ul 低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒PSGD/HOXB13 同源盒蛋白HOXB13抗體100 ul 低分子質量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)ELISA試劑盒Heparanase 乙酰肝素酶抗體100 ul 登革熱抗體IgM(DF-Ab IgM)ELISA試劑盒phospho-HP1 alpha (Tyr24) 酸化異染色質蛋白1抗體(果蠅)100 ul 登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒HOXA10 HOXA10抗體100 ul 登革熱(DF)抗體(IgG)ELISA試劑盒Phospho-HP1(Tyr43) 異染色質蛋白1酸化抗體(果蠅)100 ul 的牛血清白蛋白(BSA)ELISA試劑盒HPL/PL 胎盤泌素抗體100 ul |