客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
Boc-L-谷氨酰RANK Ligand (R2) Antibody異戊硫

Boc-L-氨酸 N-丁二酰亞酯SimpleChIP® Mouse CXCL2 Promor Primers

BOC-D-氨酸Nur77 (D63C5) XP® Rabbit mAb鹽酸甲氧氯普

BOC-β-氨酸Nur77 (D63C5) XP® Rabbit mAb3,二甲基酸

(R)-N-BOC-代氨酸甲酯Ras Antibody2,二甲基噻唑

BOC-D-精氨酸鹽酸鹽TRRAP (D2966) Antibody馬來酰亞

Nα-BOC-D-精氨酸鹽酸鹽一水合物TRRAP (P2032) Antibody對(duì)甲氧基異酸酯

Boc-Arg(Mts)-OH·CHARAG1 (D36B3) Rabbit mAb乙酰乙酸異酯

BOC-硝基-L-精氨酸p63 (D9L7L) XP® Rabbit mAbdelta-戊內(nèi)酯

N-叔丁氧羰基-N'-甲磺?；?-L-精氨酸 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 555 Conjuga)2-氨基己二酸水合物

BOC-對(duì)磺酰-D-精氨酸Phospho-EphA2 (Tyr594) Antibody氯

叔丁氧羰基-N-beta-*基-L-天門冬酰Acetyl-α-Tubulin (Lys40) Antibody溴哌啶鹽

BOC-L-天門冬酰 酯GRB2 Antibody氨基乙酯

N-叔丁氧羰基-N'-氧蒽基 -L-天門冬酰 SQSTM1/p62 (D1Q5S) Rabbit mAb2-甲基-三氟

Boc-L-天冬氨酸 芐酯 Gα(o) Antibody亞硝酸丁酯

Boc-L-天冬氨酸 環(huán)己酯 TACE Antibody2,6-二羥基-基-甲基吡啶

叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-叔丁酯 CDX2 Antibody2-溴己酸甲酯

酰嗎啉PLZF (D8G3G) Rabbit mAb乙酸乙酯
嚙蝕艾肯菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒Phospho-Tie2 (Ser1119)  酸化血管生成素受體2抗體100 ul

β防御素2(DEFB2)ELISA試劑盒Phospho-Tie2 (Tyr992)  酸化血管生成素受體2抗體1 Kit

β-防御素(β-Defensins)ELISA試劑盒RARRES1/TIG1  視黃酸受體應(yīng)答蛋白1抗體100 ug

β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA試劑盒Rarres2/TIG2  視黃酸受體應(yīng)答蛋白2抗體100 ul

β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒Rarres3/TIG3  視黃酸受體應(yīng)答蛋白3抗體100 ul

β半糖苷酶(βGAL)ELISA試劑盒TIGAR   TIGAR蛋白抗體100 ul

β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)ELISA試劑盒TIMP-1  金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體100 ul

β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒TIMP-2  金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體100 ul

β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA試劑盒TIMP-3  金屬蛋白酶組織抑制因子-3抗體20 ul
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。