微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

產(chǎn)品名稱：糞腸球菌 糞鏈球菌
貨號(hào)：YS-01J13400
拉丁文: Enterococcus faecalis

分離基物: 酸牛奶

提供形式: 凍干粉

安全等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 研究；發(fā)酵酸奶

培養(yǎng)基: 腦心浸液（BHI）：牛腦浸粉 4.0g，牛心浸粉 4.0g，蛋白胨 5.0g，酪蛋白胨16.0g，NaCl 5.0g，葡萄糖 2.0g，磷酸氫二鈉 2.5g，pH7.4 ± 0.2。121℃，15min。

生長(zhǎng)條件: 37℃，好氧

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對(duì)菌落計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜，對(duì)平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。

APC70/CRSP70  轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體大鼠全段甲狀旁腺素

APC6/CDC16  分裂周期蛋白16抗體小鼠骨膠原交聯(lián)

APC5  分裂周期蛋白5抗體人美麗線蟲凋亡基因

APC/Adenomatous Polyposis Coli  腺瘤樣息肉抗體人胸腺白血病抗原

APBB1/Fe65 protein  鐵蛋白Fe65抗體大鼠牛小腸堿性磷酸酶

APBA3/Mint3/X11gamma  β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體小鼠促卵泡素

APAF1(NT)  凋亡蛋白活性因子-1抗體（N端）小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽

APAF1(CT)  凋亡蛋白活性因子-1抗體（C端）人腫瘤特異性移植抗原

AP2M1/AP-2?  接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A

AP2 gamma  轉(zhuǎn)錄因子AP-2γ抗體小鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉

AP2 alpha  轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α抗體人足標(biāo)記蛋白/足盂蛋白

ANTXR2  炭疽素受體2抗體大鼠克拉拉蛋白

ANTXR1/TEM8  腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體大鼠腎上腺素

Anthrax  抗體（采用活疫苗制備）人癌易感蛋白1

Anthrax  炭疽桿菌抗體小鼠吡啶交聯(lián)物
糞腸球菌 糞鏈球菌說明書黃褐曲霉一氧化氮合成酶-1抗體（神經(jīng)型） Naringenin-4'-O-beta-D-Glucuronide 質(zhì)量規(guī)格：BR,4000u/g

梭菌轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)蛋白NKX6.1抗體 (±)-Naringenin 質(zhì)量規(guī)格：BR,100 U/mg

褐球固氮菌造血蛋白1抗體 3-Hydroxy Cyclobenzaprine 質(zhì)量規(guī)格：BR,75U/MG

根瘤菌骨巢蛋白抗體 Cyclobenzaprine N-β-D-Glucuronide 質(zhì)量規(guī)格：>500U/MG,BR

頂孢霉NUP54抗體 Desmethyl Cyclobenzaprine Hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

釀酒酵母親核素β1抗體 Delta9(11)-Methyltestosterone 質(zhì)量規(guī)格：0.97

寡養(yǎng)單胞菌屬谷氨酸受體NMDAζ1抗體 Vitamin E 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

柯奈尼亞小單孢菌谷氨酸受體NMDAζ2抗體 D-α-Tocopheryl Succinate 質(zhì)量規(guī)格：BR，>7U/MG, powder