PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 豬圓環(huán)病毒2型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Porcine Circovirus 2 (PCV-2) | 貨號 | YSP97089 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 羧酸酯酶1(CES1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑曲霉 5g 嘌呤能受體P2X7(P2RX7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 金黃殼囊孢菌 25g 酪氨酸3/色氨酸5單加氧酶激活蛋白ζ(YWHAζ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 大腸埃希氏桿菌 5g Ⅻ型膠原(COL12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 棒曲霉 25g 脂酰肌醇特異性酯酶Cγ2(PLCγ2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 伯頓畢赤酵母 5g Ki-67蛋白(Ki67P)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 托魯斯山鏈霉菌 1g 雙特異性酸酶5(DUSP5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 巨大芽孢桿菌 25g 鈣結(jié)合蛋白(CALB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 擬粉紅鎖擲孢酵母 5g 雙糖鏈蛋白聚糖(BGN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 金色鏈霉菌 1g 神經(jīng)源性絲氨酸蛋白酶抑制劑(NSP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 褶緣黑點口蘑 5g 70kDa熱休克蛋白結(jié)合蛋白1(HSPBP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 擬青霉 1g 多型性腺瘤基因樣蛋白1(PLAGL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 25g 雙特異性酸酶1(DUSP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 苛求芽孢桿菌 5g 網(wǎng)鈣蛋白2(RCN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 長柄鏈格孢 1g 電子傳遞黃素蛋白脫氫酶(ETFDH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 冷溫木拉克酵母 5g 低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(LRP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 泗川假黃單胞菌 1g 細胞色素P450家族成員26A1(CYP26A1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 5g 絲氨酸肽酶抑制因子Kazal型5(SPINK5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 堅強芽孢桿菌 1g 豬圓環(huán)病毒2型探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化著絲粒蛋白AAQP5(aquaporin Proin-5) 水通道蛋白-5抗原100 ul 酸化二氫嘧啶酶樣2抗體IRS P53 (Insulin receptor substra P53)(多肽) 1 Kit 克拉拉細胞蛋白抗體Ingrin Beta chain (ITG- Beta3/ITGB3) 整合素-β3(抗原)100 ul B淋巴細胞粘附分子CD22抗體AQP9(aquaporin Proin-9) 水通道蛋白-9抗原 (多肽抗原)100 ul 組織蛋白酶G抗體Leptin 瘦素(多肽抗原)100 ul 刺激分子B7-1蛋白抗體Leptin receptor(long) 瘦素受體(長)(抗原)100 ul 1號染色體開放閱讀框145抗體phospho-AR/androgen receptor( p-Ser580)peptide 雄激素受體(多肽)1 Kit 20號染色體開放閱讀框186抗體MAPK-1/2 絲裂原活化蛋白激酶(抗原)100 ul 細胞角蛋白7抗體MAPKK2 絲裂原活化蛋白激酶激酶100 ul |