特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 雙芽巴貝斯蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Babesia bigemina | 貨號 | YSP96400 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 雷米普利C34H42O196-HYDROXY-PYRIDINEBORONIC ACID 雷米普利(標準品)C20H20NO4對二甲酸二鈉鹽 C20H23NO4(CBZ-PIPERAZINYL)PHENYLBORONIC ACID, PINACOL ESR (標準品)C21H24O6(S)-(+)-脫落酸 鹽酸甲噻/泊酚雜質(zhì)JC21H28O66-溴-甲酰色酮 鹽酸甲噻/泊酚雜質(zhì)J(標準品)C20H30O2L-氨酰-L-色氨酸 N-乙酰神經(jīng)氨酸/唾液酸C21H22O41-萘酚-磺酸鈉 紅霉素C10H8O41-(溴基)哌鹽酸鹽 紅霉素(標準品)C3H7-氯-2-乙烷 高烏甲素(標準品)C15H12O5肼單鹽酸鹽 高烏甲素C23H24O61-[2-(三氟甲基)基]咪唑 鹽酸多巴酚丁C27H48O3,二棕櫚酸吡哆酯 羥基β環(huán)糊精;2-羥基-β-環(huán)糊精C24H28O4雙(2-乙基己基)癸二酸酯 羧甲基殼聚糖C29H44O82,5-二氟-7,7,8,8-四醌二 依諾肝素鈉C44H70O17L-甘露 依諾肝素鈉(標準品)C27H44O75-十二炔 曲美布汀馬來酸鹽; 3,4,5-*氧基甲酸C20H20O11羥基-甲氧酸頻哪酯 馬來酸曲美布?。藴势罚〤22H22O10氯-2-乙氧羰基基酸 雙芽巴貝斯蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒白介素17(IL-17)ELISA試劑盒CK II alpha/STK 屬絲/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶抗體100 ul 白介素16(IL-16)ELISA試劑盒P-CK 廣譜細胞角蛋白PCK抗體100 ul 白介素15(IL-15)ELISA試劑盒CK18 細胞角蛋白18抗體1 Kit 白介素13(IL-13)ELISA試劑盒CK18 細胞角蛋白18抗體(C端)100 ul 白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒CK18 細胞角蛋白18抗體100 ul 白介素12(IL-12/P40)ELISA試劑盒CK14/17/42/10 細胞角蛋白14抗體500 ul 白介素11(IL-11)ELISA試劑盒CK15 細胞角蛋白15抗體100 ul 白介素10(IL-10)ELISA試劑盒CK16 細胞角蛋白16抗體1 Kit 白喉IgG抗體ELISA試劑盒CK17 細胞角蛋白17抗體100 ul |