熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點：
成本高；
設(shè)計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
天青石藍C10H18O對己基聯(lián)甲酸

天青 B 曙紅C15H14O41-吲哚酸酯

利馬前列素C28H31NO8氯化二乙基鋁

天青II曙紅C28H29NO7(1-重氮-2-氧代基)膦酸二甲酯

菲律賓菌素;非律平;FilipinC36H36N2O8(3AR,7AS)-REL-八氫-1H-異吲哚鹽酸鹽

瑞舒伐他汀/羅蘇伐他汀游離酸C20H18O82-溴-氯

蘇丹I/溶劑黃14C20H20N2O3δ-十三烷酸內(nèi)酯

蘇丹II/蘇丹2/溶劑橙7C20H20N2O42,3,4,5,6-五氟甲酮

蘇丹Ⅲ/蘇丹紅III/溶劑紅23C20H20N2O4N乙基-N(2-羥乙基)-2-甲基-1,二硫酸鹽

蘇丹Ⅳ/蘇丹紅4/溶劑紅24C30H50O2四(甲硫代)四硫富瓦

油紅O/溶劑紅27/蘇丹紅5BC30H48O2鹽酸雷尼替丁

蘇丹紅G/溶劑紅1/油紅113C15H22O2酮基膦酸二甲酯

蘇丹/溶劑黑3C15H22O21,雙[2-(羥基)-2-基]

蘇丹紅BC16H16O5依匹斯汀鹽酸鹽

蘇丹紅7B/溶劑紅19/脂肪紅7BC8H10O3氧基

蘇丹藍II/溶劑藍35C9H12O3氨基磺酸

吖啶橙/性橙14C11H12O5METHYL GUAIAZULENE-CARBOXYLA

甲基紅C8H8O4METHOXYCARBONYL-5-NITROPHENYLBORONIC ACID, PINACOL ESR
鳥類多瘤病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒白介素6(IL-6)ELISA試劑盒CHK1  細胞周期檢測點激酶1抗體100 ul

白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒CHK2  細胞周期檢測點激酶2抗體100 ul

白介素4(IL-4)ELISA試劑盒Phospho-CHK2 (Thr68)  酸化細胞周期檢測點激酶2抗體300 ul

白介素35(IL-35)ELISA試劑盒Chloramphenicol  氯霉素抗體100 ul

白介素33(IL-33)ELISA試劑盒Gentamicin  慶大霉素抗體300 units

白介素31(IL-31)ELISA試劑盒tracycline  四環(huán)素抗體100 ul

白介素3(IL-3)ELISA試劑盒Gentamicin Monoclonal Antibody  慶大霉素單克隆抗體1 Kit

白介素2受體β(IL2rb/CD122)ELISA試劑盒Oxytracycline  土霉素抗體100 ul

白介素2可溶性受體α鏈(sIL-2Rα/CD25)ELISA試劑盒Metronidazole  甲硝唑抗體1 Kit
PCR技術(shù)的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。