產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。 產(chǎn)品名稱:副豬嗜血桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱:Haemophilus parasuisPCR 編號(hào):HE31051-R 類別:PCR檢測(cè)試劑盒 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。 ? 儲(chǔ)需要自備的器材: 1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。 2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水 處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。 特點(diǎn): 1.即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。 2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。 3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。 保存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 乙酰羥肟酸乙酯/N-羥基乙酰亞胺酸乙酯/Ethyl acetohydroxamate 質(zhì)量規(guī)格:1:3000,BR 包裝;500g 菲/1,2-苯并萘/Phenanthrene 質(zhì)量規(guī)格:≥50 U/mg,sigma 原裝 包裝;100g 氧化鋇/無(wú)氧化鋇/重土/鋇氧重土/一氧化鋇/Barium oxide 質(zhì)量規(guī)格:>98% 包裝;25g 過(guò)硼酸鈉/高硼酸鈉/四合高硼酸鈉/四合過(guò)硼酸鈉鹽/Sodium perborate tetrahydrate 質(zhì)量規(guī)格:1:12000,BR 包裝;5g 過(guò)硼酸鈉一物/高硼酸鈉一物/Sodium perborate monohydrate 質(zhì)量規(guī)格:≥30units/mg protein,sigma分裝 包裝;25g 對(duì)苯酚/4-苯酚/對(duì)酚/4-酚/4-Iodophenol 質(zhì)量規(guī)格:≥30units/mg protein,sigma原裝 包裝;5g 對(duì)苯基苯酚/對(duì)苯基酚/對(duì)羥基聯(lián)苯/4-羥基聯(lián)苯/4-聯(lián)苯酚/(1,1'-二苯基)-4-酚/4-苯基苯酚/4-苯基酚/4-苯酚/4-Hydroxybiphenyl 質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)分 包裝;1g 三縮四乙二醇/四甘醇/四縮乙二醇/聚乙二醇-4/TEG 質(zhì)量規(guī)格:≥95%,進(jìn)口半硫酸鹽 包裝;5g 木質(zhì)素磺酸鈉/分散劑CMN/分散劑M-9/木素磺酸鈉/木質(zhì)磺素鈉/木質(zhì)磺酸鈉/Sodium lignosulfonate 質(zhì)量規(guī)格:≥90%,進(jìn)分 包裝;100g 安息香膠/安息香浸膏/安息香酊/Gum benzoin 質(zhì)量規(guī)格:≥99%,BR 包裝;25g 龍腦/2-莰醇/冰片/龍膽/合成龍腦/內(nèi)型-1,7,7-*基-二環(huán)[2.2.1]庚-2-醇/樟醇/釣樟醇/外-2-莰醇/異龍腦/Borneol 質(zhì)量規(guī)格:3萬(wàn)U/g 包裝;500g 松香酸/1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氫化-1,4a-二甲基-7-異丙基-1-菲甲酸/樅酸/松脂酸/熟松香/樹(shù)脂酸/Abietic acid 質(zhì)量規(guī)格:BR,70萬(wàn)u/ml液體 包裝;25g 三聚氯氰/2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪/三聚氰酰氯/氰脲酰氯/氰尿酰氯/三聚/三氯三聚氰/Cyanuric chloride 質(zhì)量規(guī)格:BR,酶活5萬(wàn),粉末 包裝;5g 2-乙烯吡啶/2-乙烯基吡啶/乙烯基吡啶單體/2-乙烯基氮苯/2-吡啶基乙烯/2-VP 質(zhì)量規(guī)格:≥2000KU/mg protein,(牛胰) 包裝;100g 1,1,2-三氯三氟乙烷/ 1,1,2-三氟-1,2,2-三氯乙烷/氟利昂-113/1,1,2-三氟三氯乙烷/三氯三氟代乙烷/1,1,2-Trichlorotrifluoroethane 質(zhì)量規(guī)格:BR,4000u/g 包裝;25g 硫酸鉻/六硫酸鉻/硫酸鉻(Ⅲ)六/Chromium(III) sulfate hexahydrate 質(zhì)量規(guī)格:BR,100 U/mg 包裝;500g 硫酸鉻溶液/無(wú)硫酸鉻/硫酸鉻(III)/Chromium(III) sulfate 質(zhì)量規(guī)格:BR,75U/MG 包裝;10mg 副豬嗜血桿菌PCR檢測(cè)試劑盒Bacillus│licheniformis 中文名稱:地衣芽胞桿菌種屬:Bacillus│licheniformis分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:微生物/高溫菌(55℃)培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:823生長(zhǎng)條件:55℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:平均分子量 ~475,含100 ppm MeHQ,200 ppm BHT Rhodothermus│marinus 中文名稱:海洋紅嗜熱鹽菌種屬:Rhodothermus│marinus分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:微生物/耐壓菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:823生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Idiomarina│zobellii 中文名稱:左貝爾海源菌種屬:Idiomarina│zobellii分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:微生物/耐堿菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:823生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Agarivorans│gilvus 中文名稱:淡黃色噬瓊膠菌種屬:Agarivorans│gilvus分離基物:生物樣/滸苔提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:準(zhǔn)模式菌株:;產(chǎn)酶菌株/產(chǎn)瓊脂酶培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:30-37℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97% Alcanivorax│venustensis 中文名稱:優(yōu)雅食烷菌種屬:Alcanivorax│venustensis分離基物:樣/表層海提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:有機(jī)污染物降解菌/石油烴類降解菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:745生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97% Idiomarina│baltica 中文名稱:波羅的海海源菌種屬:Idiomarina│baltica分離基物:樣/表層海提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油降解菌群培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:745生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Gracilimonas│sp. 中文名稱:纖細(xì)單胞菌種屬:Gracilimonas│sp.分離基物:樣/表層海提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油降解菌群培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:745生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Alcanivorax│jadensis 中文名稱:亞德食烷菌種屬:Alcanivorax│jadensis分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:有機(jī)污染物降解菌/石油烴類降解菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:745生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:90% 反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。 引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。 技術(shù)原理: DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。 在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性) 產(chǎn)品僅用于科研發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。 |