微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

產(chǎn)品名稱：動物雙歧桿菌
貨號：YS-01J13438
拉丁文: Bifidobacterium animalis

提供形式: 凍干物

安全等級: 1

模式菌株: yes

應(yīng)用領(lǐng)域: 分類學(xué)研究。

培養(yǎng)基: BBL液體培養(yǎng)基：蛋白胨 15.0g,葡萄糖 20.0g，酵母浸膏 2.0g，可溶性淀粉 0.5g，氯化鈉 5.0g，L-半胱氨酸 0.5g，番茄浸粉 5.0g，肝浸粉 2.0g，吐溫80 1.0g，蒸餾水1L，pH6.6-7.0。115℃，20min。

生長條件: 37℃，厭氧

存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。

兔VI型膠原(COL6) 心鈉素Ⅱ，大鼠，小鼠，兔血小板衍化生長因子γ抗體

兔肽基精氨酸脫亞氨酶IV(PADI4)心鈉素Ⅲ，大鼠血小板47蛋白抗體

兔新蝶呤 (Neopterin) 帶3蛋白質(zhì)（547-553），人相關(guān)血漿蛋白A2抗體

兔白分化抗原CD4(CD4) 帶3蛋白質(zhì)（824-829），人血漿谷氨酸羧肽酶抗體

兔上皮中性?；罨?/span>78(ENA-78) 堿性成纖維生長因子磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體

兔β內(nèi)酰酶抑制劑(BLI) 大內(nèi)皮素-1（1-38），人撲克蒙蛋白抗體

兔T受體(TCR)大內(nèi)皮素-1 （1-39），豬癌易感基因相關(guān)蛋白2

兔皮膚T淋巴相關(guān)抗原(CLA/CTAGE) 腦鈉素-32，大鼠細(xì)小清蛋白抗體

兔皮膚橋蛋白(DPT) 鈴蟾肽磷脂酰肌聚糖A抗體

兔斑型POZ蛋白(SPOP)緩激肽原鈣粘蛋白11抗體

兔抗肌動蛋白抗體(AAA) 緩激肽（1-5）P選擇素糖蛋白配體1抗體

兔微管關(guān)聯(lián)蛋白(MAPτ)緩激肽（1-6）蛋白激酶N2抗體

兔骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)緩激肽（1-7）G蛋白偶合受體激酶2抗體

兔16α羥基雌酮1(16-α OHE-1) 頰肽早期發(fā)育調(diào)控蛋白2抗體

兔白介素9(IL-9)磷酸酶，雞磷酯酶Cβ3

兔神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4(NRG-4)降鈣素，人血小板源性生長因子A抗體
動物雙歧桿菌菌種傳代鼠傷寒沙門氏菌血小板活化因子抗體

栗疫菌蛋白酶激活受體-1抗體

假單胞菌蛋白酶激活受體-2抗體

利古里亞游動放線菌蛋白酶活化受體4抗體

釀酒酵母多腺苷二磷酸多聚酶抗體/多聚ADP-核糖聚合酶1

豬布魯氏菌配對盒基因3抗體

蠟狀芽孢桿菌配對盒基因8抗體

釀酒酵母配對盒基因9抗體